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產(chǎn)品名稱:細(xì)胞培養(yǎng)試劑 活性氧檢測試劑盒

產(chǎn)品型號:CA1410

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:細(xì)胞培養(yǎng)試劑 活性氧檢測試劑盒
貨號 :CA1410
規(guī)格 :100-500T
活性氧檢測試劑盒 (Reactive Oxygen Species Assay Kit) 是一種利用熒光探針 DCFH-DA 進行活性氧檢測的試劑盒。DCFH-DA 本身沒有熒光,可以自由穿過細(xì)胞膜,進入細(xì)胞內(nèi)后,可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而 DCFH 不能通透細(xì)胞膜,從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。

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CA1410細(xì)胞培養(yǎng)試劑 活性氧檢測試劑盒的詳細(xì)資料:

細(xì)胞培養(yǎng)試劑 活性氧檢測試劑盒
貨號 :CA1410
規(guī)格 :100-500T


產(chǎn)品內(nèi)容 :

A 液 DCFH-DA(10 mM) 0.1 ml  −20 ºC 保存
B 液 活性氧陽性對照(Rosup, 50mg/mL ) 1 ml −20 ºC 保存
  說明書  1 份  


產(chǎn)品簡介 :
    活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、 過氧化氫、 及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物(O2? ? ,H2O2, ?OH, ONOO ? , ?NO)等,參與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。采用
2,7-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA)是迄今常用、靈敏的細(xì)胞內(nèi)活性氧檢探針。DCFH-DA 沒有熒光,進入細(xì)胞后被酯酶水解為 dichlorofluorescin (DCFH)。在活性氧存在時 DCFH 被氧化為不能透過細(xì)胞膜的強綠色熒光物質(zhì) dichlorofluorescein (DCF),其熒光在激發(fā)波長 502 nm,發(fā)射波長 530 nm 附近有大波峰,強度與細(xì)胞內(nèi)活性氧水平成正比。此活性氧檢測系統(tǒng)本底低,靈敏度高,重復(fù)性好,操作簡便。
本試劑盒適于熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡等圖像檢測,熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀定量 ROS 檢測。


作波長:
適宜激發(fā)波長 500、485 (500 ± 15 nm),適宜發(fā)射波長 525 (530 ± 20 nm)。也可按照 FITC 熒光檢測條件檢測。


操作步驟 :
一 、 試劑準(zhǔn)備 :
    1. DCFH-DA 可稀釋于培養(yǎng)基或緩沖液中。 血清或培養(yǎng)基顏色并不影響 DCFH-DA 及細(xì)胞內(nèi)熒光產(chǎn)生, 但可能會影響熒光顯微鏡觀察,干擾熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀熒光測定。可將 DCFH-DA 稀釋于無酚紅培養(yǎng)基或適宜的緩沖液如 PBS 中。這依賴于使用何種熒光設(shè)備進行測定。
    2. 加入 DCFH-DA 的時機或孵育時間,以終能順利檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧為目的。藥物處理時間較短(<2小時)或預(yù)計 ROS 效應(yīng)較弱,可先加或同時加入 DCFH-DA。反之,treat 刺激時間較長(>6 小時)或預(yù)計產(chǎn)生ROS 效應(yīng)較強,可后加 DCFH-DA。
    3. 活性氧供體含高純度 12 mM H2O2。加入細(xì)胞后其本身即是一種活性氧,而且在代謝過程中可產(chǎn)生其它類型的活性氧,均可使 DCFH-DA 氧化為 DCF 呈現(xiàn)強綠色熒光。因而,用戶可使用該試劑作為測試實驗系統(tǒng)或儀器的陽性試劑,以初步觀察細(xì)胞活性氧所產(chǎn)生的熒光的一般特征,并且也可以將該實際作為實驗的一個陽性對照。推薦該試劑的細(xì)胞工作濃度為 20~100 µM 或更低濃度,但超過 200µM 將產(chǎn)生細(xì)胞毒。如果用戶熟悉 ROS 熒光或?qū)嶒灈]有必要采用陽性對照,可以不加該試劑。
二 、 加入熒光探針 :
    1. 加入 DCFH-DA 于培養(yǎng)基,推薦初始工作濃度為 10 µM。對不同的細(xì)胞和處理,DCFH-DA 工作濃度可為 100 nM~20 µM,需進行預(yù)實驗確定合適的濃度??傮w稀釋倍數(shù)應(yīng)在 1:500~1000 以上以避免 DMSO 對細(xì)胞的影響。以 DMSO 作為溶劑對照。
    2. 37 ºC 孵育細(xì)胞 30min~幾個小時,通常 30-60min 即可。孵育時間長短與細(xì)胞類型、刺激條件、DCFH-DA 濃度有關(guān)。
    3. PBS 洗滌細(xì)胞 2 次。
三 、 熒光檢測
    采用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡圖像檢測照相,綠色熒光強度代表活性氧水平。也可進行微板熒光分析儀(multiwell fluorescence plate reader)實時或每 10 分鐘分時逐點檢測熒光強弱。對于流式細(xì)胞儀可將細(xì)胞用胰酶消化 PBS 洗滌后重懸檢測。

相關(guān)文獻:

《Gecko Active Components Regulates Endoplasmic Reticulum Stress to Induce the Apoptosis of KYSE150 Cells through PERK Pathway》 作者:Yimeng Duan, Lengxin Duan, Zeyue Huang, Bingbing Wang, Jiangang Wang 期刊:Journal of Biosciences and Life Sciences 影響因子:0.552 PMID:
《Medicinal supplement genipin induces p53 and Bax?dependent apoptosis in colon cancer cells》 作者:Jingwang Ye, Jing Li, Xiangfeng Wang, Ling Li 期刊:Oncology Letters 影響因子:1.871 PMID:30127884
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:Jie Zhang,Shakil Ahmad,Lan-Ying Wang,Qian Han,Jian-Chun Zhang,Yan-Ping Luo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448
《白頭翁湯正丁醇提取物誘導(dǎo)白念珠菌生物被膜細(xì)胞凋亡》 作者:施高翔, 汪云霞, 馮鑫, 邵菁, 汪天明 期刊:中國真菌學(xué)報 影響因子:0.576 PMID:
《Autologous decellularized extracellular matrix protects against H2O2-induced senescence and aging in adipose-derived stem cells and stimulates proliferation in vitro》 作者:Xiaofang Yu, Yucang He, Zhuojie Chen, Yao Qian, Jingping Wang, Ziwan Ji, Xiaoyan Tan, Liqun Li, Ming Lin 期刊:Bioscience  Reports 影響因子:2.535 PMID:31048361
《In vitro evaluation of the neuroprotective effect of oligo-porphyran from Porphyra yezoensis in PC12 cells》 作者:YingJuan Liu,Zhenzhen Deng,Lihua Geng,Jing Wang,Quanbin Zhang 期刊:Journal of Applied Phycology 影響因子:2.635 PMID:
 

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