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產(chǎn)品名稱:Mouse IL-1β ELISA KIT

產(chǎn)品型號(hào):96T

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):Mouse IL-1β ELISA KIT索萊寶ELISA試劑盒的優(yōu)勢(shì):
1,包被的酶標(biāo)板單板可拆(能拆分成12個(gè)8孔的酶標(biāo)條)
2,提供免費(fèi)代測(cè)代檢服務(wù),代出實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
3,發(fā)文章高獎(jiǎng)勵(lì)
4,磁鐵可吸附式包裝盒,包裝精美耐用

免費(fèi)咨詢:010-50973130

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96TMouse IL-1β ELISA KIT的詳細(xì)資料:

 

Mouse IL-1β ELISA KIT

目       錄

 

背景介紹………………………………………………………………………………

 

檢測(cè)原理………………………………………………………………………………

 

注意事項(xiàng)………………………………………………………………………………

 

安全提示………………………………………………………………………………

 

試劑盒組成及儲(chǔ)存……………………………………………………………………

 

自備實(shí)驗(yàn)器材…………………………………………………………………………

 

樣品收集及儲(chǔ)存………………………………………………………………………

 

試劑準(zhǔn)備………………………………………………………………………………

 

檢測(cè)步驟………………………………………………………………………………

 

結(jié)果判斷………………………………………………………………………………

 

參數(shù)表征………………………………………………………………………………

 

參考文獻(xiàn)………………………………………………………………………………

 

常見(jiàn)問(wèn)題分析及解決辦法……………………………………………………………

Mouse IL-1β ELISA KIT背景介紹:

    IL-1分為IL-1a, IL-1β兩種,IL-1在不同種屬中有較高同源性。在氨基酸水平上,IL-1α和IL-1β在不同種屬同源性分別為60%~70%和75%~78%;但在同一種屬中IL-1α與IL-1β同源性只有25%。IL-1β主要由血液中的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生 (18), 星形細(xì)胞,少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞,NK細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞,角質(zhì)形成細(xì)胞,巨核細(xì)胞,血小板,神經(jīng)元,中性粒細(xì)胞,成骨細(xì)胞,許旺細(xì)胞,滋養(yǎng)層細(xì)胞,T細(xì)胞和成纖維細(xì)胞也可產(chǎn)生IL-1β。IL-1具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)作用,并有致熱和介導(dǎo)炎癥的作用。

 Mouse IL-1β ELISA KIT

檢測(cè)原理

    Solarbio (Solarbio ®)ELISA試劑盒采用基雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。將抗小鼠IL-1β單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上;分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本,標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的小鼠IL-1β會(huì)與酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合;洗板后加入生物素化抗小鼠IL-1β抗體,該抗體會(huì)與板子上包被抗體捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的小鼠IL-1β發(fā)生特異性結(jié)合;洗板后加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素,生物素與鏈霉親和素會(huì)發(fā)生高強(qiáng)度的非共價(jià)結(jié)合;洗板后加入顯色劑底物TMB,若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃度的小鼠IL-1β,則HRP會(huì)使無(wú)色TMB變成不同深淺(正相關(guān))的藍(lán)色物質(zhì),加入終止液后反應(yīng)孔會(huì)變成黃色;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測(cè)定反應(yīng)孔樣品吸光度(OD),樣本中的小鼠IL-1β濃度與OD成正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計(jì)算出樣本中小鼠IL-1β的濃度。

原理圖:

注意事項(xiàng):※※※

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑。

2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在2-8℃冰箱,已復(fù)溶未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請(qǐng)丟棄。

3. 試劑盒使用前請(qǐng)在室溫恢復(fù)30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。

4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè),且加入試劑的順序應(yīng)保持*。

5. 為避免交叉污染,請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用1次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。.

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過(guò)程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶 

蓋上,使用前請(qǐng)離心處理(5-10 S即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。

7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液終止液可以通用外,請(qǐng)不要使用其他來(lái)源試劑盒內(nèi)含的          

試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。

8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測(cè)均做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 

安全提示:試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時(shí)請(qǐng)帶上手套并注意防護(hù);在操作過(guò)程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請(qǐng)用大量清水清洗;檢測(cè)血液樣本及其它體液樣本時(shí),請(qǐng)按國(guó)家生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

 

試劑盒組成及儲(chǔ)存

試劑盒組成

規(guī)格(96T)

規(guī)格(48T)

保存條件

抗體預(yù)包被酶標(biāo)板

 

8*12

8*6

2-8

標(biāo)準(zhǔn)品

2支

1支

-20

SR1標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液

16 ml/瓶

8 ml/瓶

2-8

濃縮生物素化抗體

120 ul(100X)

60 ul(100X)

2-8

SR2生物素化抗體稀釋液

16 ml/瓶

8 ml/瓶

2-8

濃縮酶結(jié)合物(避光)

120 ul(100X)

60 ul(100X)

2-8

SR3酶結(jié)合物稀釋液

16 ml/瓶

8 ml/瓶

2-8

濃縮洗滌液 (20×)

30 ml/瓶

15 ml/瓶

2-8

顯色底物(避光)

12 ml/瓶

6 ml/瓶

2-8

終止液

12 ml/瓶

6 ml/瓶

2-8

封板膠紙

4張

2張

 

說(shuō)明書

1份

1份

 

 

自備實(shí)驗(yàn)器材(不提供,可代購(gòu))

1. 酶標(biāo)儀(主波長(zhǎng)450nm,參考波長(zhǎng)630nm)

2. 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3. 洗板機(jī)或洗瓶

4. 37℃

5. 雙蒸水,去離子水,量筒等

6. 稀釋用聚丙烯試管

 樣本收集及儲(chǔ)存:

1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:

將細(xì)胞培養(yǎng)基移無(wú)菌離心管,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)可放入2-8℃儲(chǔ)存),避免反復(fù)凍融。

2. 血清樣本:

室溫血液自然凝固20 min后,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)可放入2-8℃儲(chǔ)存),保存過(guò)程中如有沉淀,請(qǐng)?jiān)俅坞x心,避免反復(fù)凍融。

3. 血漿樣本:

將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際要求選擇EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合20 min,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)可放入2-8℃儲(chǔ)存),避免反復(fù)凍融。

注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測(cè)結(jié)果;如果樣本中的靶標(biāo)物檢測(cè)濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的高值,請(qǐng)將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測(cè),建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋倍數(shù)。

試劑準(zhǔn)備

1. 試劑回溫:先在實(shí)驗(yàn)前30 min將試劑盒,待測(cè)樣本放置于室溫,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,請(qǐng)放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。

2. 配制洗滌液:預(yù)先計(jì)算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將20倍濃縮洗滌液稀釋成1倍應(yīng)用液,未用完的濃縮洗滌液放入4℃冰箱保存。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1)1ml凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為2000pg/ml),然后按照以下濃度:2000、1000、 500、 250、125、62.5、31.25、 0 pg/ml進(jìn)行稀釋。復(fù)溶過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品原液(2000pg/ml)未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~-80℃冰箱,具體如下。

 

4. 生物素化抗體工作液:預(yù)先計(jì)算好試驗(yàn)所需用量,用生物素化抗體稀釋液(SR2)100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應(yīng)用工作液(稀釋前充分混勻請(qǐng)在30分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中。

生物素化抗體工作液具體稀釋方法如下:

板條

濃縮生物素化抗體(1:100):μL

檢測(cè)稀釋液(SR2):μL

2

20

1980

4

40

3960

6

60

5940

8

80

7920

10

100

9900

12

120

11880

 

5. 酶結(jié)合物工作液:按每次試驗(yàn)所需用量配制,用酶結(jié)合物稀釋液(SR3)將100濃縮酶結(jié)合物稀釋成1倍應(yīng)用工作液稀釋前離心),請(qǐng)?jiān)?0分鐘內(nèi)使用

酶結(jié)合物工作液具體稀釋方法如下:

板條

濃縮酶結(jié)合物(1:100):μL

檢測(cè)稀釋液(SR3):μL

2

20

1980

4

40

3960

6

60

5940

8

80

7920

10

100

9900

12

120

11880

 

6. 洗滌方法:

自動(dòng)洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為300ul/孔,注與吸出間隔為30秒,洗板5次。

手工洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液300ul/孔,靜止30秒后甩凈酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板5次。

 

 

結(jié)果判斷

1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長(zhǎng)測(cè)定 OD 值。選擇雙波長(zhǎng)檢測(cè),參考波長(zhǎng)為 630 nm。如不能進(jìn)行雙波長(zhǎng)檢測(cè),請(qǐng)用 450 nm 的OD測(cè)定值減去630 nm的OD測(cè)定值。

2.計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均OD值:每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值

3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),吸光度OD值為縱坐標(biāo),用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品中IL-1β含量可通過(guò)對(duì)應(yīng)OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

4.若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重新檢測(cè),計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。

參數(shù)表征

 

1. 數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線

 

標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/ml)

OD值1

OD值2

平均值

矯正值

0

0.066

0.065

0.065

--------

31.25

0.136

0.138

0.137

0.071

62.5

0.220

0.230

0.225

0.159

125

0.370

0.36

0.365

0.299

250

0.656

0.648

0.652

0.586

500

1.212

1.198

1.205

1.139

1000

2.121

2.119

2.12

2.054

2000

3.014

3.012

3.013

2.947

 

本圖僅供參考,應(yīng)以當(dāng)次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算小鼠IL-1β的樣本含量

2. 靈敏度:

低可檢測(cè)小鼠IL-1β濃度達(dá)15pg/ml,

20個(gè)零標(biāo)準(zhǔn)品濃度OD的平均值加上兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差,計(jì)算相應(yīng)的可檢測(cè)濃度。

3. 特異性:

不與小鼠IL-1ra 、IL-1α、IL-1 RI、IL-1 RII等反應(yīng),IL-1β等反應(yīng)

4. 重復(fù)性:

板內(nèi),板間變異系數(shù)<10%

5. 回收率:

在選取的健康小鼠血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入 3 個(gè)不同濃度水平的小鼠IL-1β,計(jì)算回收率。

樣本類型

平均回收率(%)

范圍(%)

血漿

96

91-101

細(xì)胞培養(yǎng)上清

101

95-107

6. 線性稀釋

分別在選取的4 份健康小鼠血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 IL-1β,在標(biāo)準(zhǔn)曲線動(dòng)力學(xué)范圍內(nèi)進(jìn)行稀釋,評(píng)估線性。

稀釋比例

回收率(%)

血漿

細(xì)胞培養(yǎng)上清

1:2

平均回收率(% )

95

98

范圍(%)

88-102

93-103

1:4

平均回收率(% )

92

104

范圍(%)

87-97

101-107

1:8

平均回收率(% )

95

109

范圍(%)

92-98

105-113

1:16

平均回收率(% )

101

112

范圍(%)

96-106

107-117

 

參考文獻(xiàn)

1. Oppenheim, J.J. et al. (1986) Immunol. Today 7:45.

2. March, C.J. et al. (1985) Nature 315:641.

3. Thornberry, N.A. et al. (1992) Nature 356:768.

4. Sims, J.E. et al. (1988) Science 241:585.

5. Huang, J. et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12829.

6. Greenfeder, S.A. et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:13575.

7. Sims, J.E. et al. (1994) Clin. Immunol. Immunopathol. 72:9.

8. Sims, J.E. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6155.

9. Svenson, M. et al. (1993) Cytokine 5:427.

10. Giri, J.G. et al. (1994) J. Immunol. 153:5802.

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12. da Cunha, A. et al. (1993) J. Neuroimmunol. 42:71.

 

 

 

 

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