產(chǎn)品名稱:SYBR Green I核酸染料(PCR級(jí),10000X)
產(chǎn)品型號(hào):SR4110
產(chǎn)品特點(diǎn):PCR試劑 SYBR Green I核酸染料(PCR級(jí),10000X)貨號(hào):SR4110規(guī)格:50/100ul保存:-20℃避光保存,有效期少一年。
免費(fèi)咨詢:010-50973130
PCR試劑 SYBR Green I核酸染料(PCR級(jí),10000X)
貨號(hào):SR4110
規(guī)格:50/100ul
保存:-20℃避光保存,有效期少一年。
產(chǎn)品說明 :
SYBR Green I 染料是一種直接與雙鏈 DNA (dsDNA) 結(jié)合的熒光染料,是熒光定量 PCR 常用的 DNA結(jié)合染料。在定量 PCR 中,SYBR Green I 可與雙鏈 DNA(dsDNA)非特異性結(jié)合后發(fā)出熒光,則可以通過檢測反應(yīng)體系中的 SYBR Green I 熒光強(qiáng)度,達(dá)到檢測 PCR 產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。游離狀態(tài)下,SYBR Green I 發(fā)出微弱的熒光,一旦與 dsDNA 結(jié)合,其熒光增加 1000 倍,一個(gè)反應(yīng)發(fā)出的全部熒光信號(hào)與出現(xiàn)的 dsDNA 量成比例,且會(huì)隨擴(kuò)增產(chǎn)物的增加而增加;所以通過檢測 PCR 反應(yīng)液中的熒光信號(hào)強(qiáng)度,可以對(duì)目的基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量,同時(shí)還可以測定擴(kuò)增的目的 DNA 段的熔解溫度。
使用說明 :
使用時(shí),配置PCR反應(yīng)混合液, 將10000×SYBR Green I濃縮液加入到PCR反應(yīng)體系, 使終濃度為0.5× (0.2×到 1×之間調(diào)整) 。以上操作建議在冰上進(jìn)行。
注: ① 反應(yīng)液配制方法和 PCR 擴(kuò)增條件請(qǐng)參照 DNA 聚合酶使用說明。
② Realtime PCR 擴(kuò)增儀的使用方法,請(qǐng)參照各儀器說明書。
注意事項(xiàng) :
使用濃度對(duì)熒光 PCR 結(jié)果的影響
SYBR Green I 的使用濃度是保證熒光定量 PCR 實(shí)驗(yàn)成功非常關(guān)鍵的因素。如果 SYBR Green I 的濃度過低會(huì)使熒光信號(hào)的變化降低,這就意味著低拷貝的樣品可能無法檢出;而在高濃度時(shí),將會(huì)抑制 PCR 反應(yīng),降低PCR 反應(yīng)效率。所以一般在使用 SYBR Green I 時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化使用濃度,反應(yīng)的終濃度為 0.2×到 1×之間。
鎂離子濃度的影響
提高鎂離子濃度可以降低SYBR Green I對(duì)PCR反應(yīng)的抑制作用。 我們建議在用SYBR Green I進(jìn)行熒光PCR反應(yīng)時(shí),鎂離子濃度比無 SYBR Green I 的普通 PCR 反應(yīng)高出 0.5~3mM。
相關(guān)產(chǎn)品 :
PC2440 Random
PC2450 Oligo T16
G8142 GoldView ‖型核酸染?劑 (5000×)
SY1040 SYBR Green ‖ (10000×)
PC1100 Taq DNA Polymerase
PC1300 Pfu DNA Polymerase
PC2100 dNTPs Mix(2.5mM each)
PC2200 dNTPs Mix(10mM each)
SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料,適用于各種電泳分析,操作簡單:無須脫色或沖洗。少可檢出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 與dsDNA 結(jié)合熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號(hào)強(qiáng),背景信號(hào)低。可適用于多種電泳分析。
用QPCR來做miRNA的擴(kuò)增其實(shí)是一件比較難的事,因?yàn)閙iRNA是只有18-23個(gè)堿基的單鏈RNA,普通的PCR擴(kuò)增方法是無法直接用的,所以目前有兩種主流的解決思路:
方法1、設(shè)計(jì)頸環(huán)引物,反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,然后結(jié)合探針的方法在PCR擴(kuò)增時(shí)進(jìn)行熒光定量,這種方法以ABI公司為代表,優(yōu)點(diǎn)是擴(kuò)增特異性好,缺點(diǎn)是成本太高,所以ABI的miRNA技術(shù)服務(wù)是很貴的
方法2、通過在miRNA 3‘端進(jìn)行加A,以延長片段的長度,然后通過特殊設(shè)計(jì)的RT引物反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,后用SYBR為熒光染料進(jìn)行定量PCR,此法優(yōu)點(diǎn)是價(jià)格便宜,操作簡單,靈敏度高,尤其對(duì)低豐度miRNA的檢測要明顯優(yōu)于探針法;缺點(diǎn)是特異性稍差,不過近研究發(fā)現(xiàn)miRNA 的3’端有多樣性。
總的來說方法2要好于方法1 ,因?yàn)橐坏﹎iRNA 3‘端增加或減少一兩個(gè)堿基,頸環(huán)引物則無法使用,也就是說方法1只能檢測某種miRNA的一種序列。
PCR試劑 SYBR Green I核酸染料(PCR級(jí),10000X)
參考文獻(xiàn):
《Regulation of insulin resistance by targeting the insulin‐like growth factor 1 receptor with microRNA‐122‐5p in hepatic cells》 作者:Li Dong,Xiaoyu Hou,F(xiàn)engsui Liu,Hong Tao,Yunjia Zhang,Hang Zhao,Guangyao Song 期刊:Cell Biology International 影響因子:2.127 PMID:30958584
《Collagen facilitates the colorectal cancer stemness and metastasis through an integrin/PI3K/AKT/Snail signaling pathway》 作者:Xiangbin Wu,Jianhui Cai,Zhigui Zuo,Jinlei Li 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:30913493
《MMP-9 secreted by tumor associated macrophages promoted gastric cancer metastasis through a PI3K/AKT/Snail pathway》 作者:Liu Lin,Yu Ye,Xiumei Zhu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:31202170
相關(guān)同類產(chǎn)品: |
版權(quán)所有 ICP備案號(hào): 管理登陸 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 總流量:836121 網(wǎng)站地圖