產(chǎn)品名稱:總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒
產(chǎn)品型號:BC1980
產(chǎn)品特點:總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒測定意義:TC 包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC 是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。測定原理:利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC;進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化FC 氧化,生成△4-膽甾烯酮和H2O2;后利用過氧化物酶催化H2O2 氧化4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在500nm 有特征吸收峰,
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總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒
總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
英文名稱:Total cholesterol (TC) content test kit
關(guān)鍵詞:總膽固醇|總膽固醇含量檢測|TC|TC含量檢測
貨號:BC1980
規(guī)格:50T/48S
產(chǎn)品簡介:
總膽固醇(Total Cholesterol,TC)是指所有脂蛋白所含膽固醇的總和,包括游離膽固醇和膽固醇酯。
利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為 FC;進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化 FC 氧化,生成△4-膽甾烯酮和 H2O2;后利用過氧化物酶催化H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物,其在 500nm 有特征吸收峰,其顏色深淺與TC 含量成正比。
試驗中所需的儀器和試劑:
可見分光光度計、天平、低溫臺式離心機(jī)、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、EP 管、蒸餾水、異丙醇。
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:異丙醇 50mL×1 瓶,自備,4℃保存;
試劑一:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 400μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 60μL×1 支,4℃保存;
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1支,10mg膽固醇,4℃保存。臨用前加入517μL提取液,振蕩溶解,即為50μmol/mL的膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。
工作液的配制:將試劑一:試劑二:試劑三按比例3mL:20μL:3μL配制工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。
操作步驟:
一、樣本處理:
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。10000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 2 秒,間隔 3 秒,總時間 3min);然后 10000g,4℃離心 10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清(漿)樣品:直接測定。
二、測定步驟:
1、 分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長 500nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將 50μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為 1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、 操作表:(在 1.5ml 離心管中依次加入下列試劑)
測定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
樣品(µL) 100 - -
標(biāo)準(zhǔn)溶液(μL) - 100 -
提取液(μL) - - 100
工作液(µL) 900 900 900
充分混勻,37℃靜置 15min,反應(yīng)完成后于 1mL 玻璃比色皿,測定 500nm 處吸
光值 A,分別記為 A 測定管、A 標(biāo)準(zhǔn)管和 A 空白管,△A=A 測定管-A 空白管,△A 標(biāo)
準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管,空白管只需測一次。
總膽固醇含量計算
一、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:
以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸,其對應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b,將△A 帶入方程得到 x(μmol/mL)
二、總膽固醇含量的計算:
1. 血清(漿)中 FC 含量計算:
TC 含量(μmol/dL)=x×100。
2. 組織中 FC 含量計算:
(1) 按樣本蛋白濃度計算
TC 含量(μmol/mg prot)=x×V 提取÷(Cpr×V 提?。?x÷Cpr。
(2) 按樣本鮮重計算
TC 含量(μmol/g 鮮重)=x×V 提取÷W= x÷W
3. 細(xì)胞、細(xì)菌中 TC 含量計算:
TC 含量(μmol/104cell)=x×V 提取÷500=0.002x。
100:1dL=100mL;V 提?。杭尤霕颖镜奶崛∫后w積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:500 萬個細(xì)胞數(shù)量。
注意事項
當(dāng)△A 大于 1 時,建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定。
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