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產(chǎn)品名稱:β-半乳糖苷酶染色試劑盒 G1580

產(chǎn)品型號:G1580

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:β-半乳糖苷酶染色試劑盒 G1580
β-半乳糖苷酶染色試劑盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時 SA-β-Gal (senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。

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G1580β-半乳糖苷酶染色試劑盒 G1580的詳細資料:

β-半乳糖苷酶染色試劑盒 G1580

產(chǎn)品說明:
β-半乳糖苷酶染色試劑盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時 SA-β-Gal (senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細胞的衰老檢測,也可以用于組織切片的衰老檢測。β-半乳糖苷酶染色試劑盒以 X-Gal 為底物,在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產(chǎn)物,光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本試劑盒僅染色衰老細胞,對衰老前的細胞(presenescent cells)、靜止期細胞(quiescent cells)、永生細胞(immortal cells)或腫瘤細胞等不會染色。對于組織切片或組織塊,可以檢測的樣品數(shù)量視樣品的大小而定,對于普通的切片也少足夠檢測 100 個樣品,使用 6 孔板測定,足夠測定 100 個樣品。

自備材料:
PBS 或 HBSS 、細胞培養(yǎng)器皿 、顯微鏡

操作步驟(僅供參考):
(一) 貼壁細胞染色:
1、 對于 6 孔板中培養(yǎng)的細胞,吸除細胞培養(yǎng)液,用 PBS 或 HBSS 洗滌 1 次,加入 1ml β-半乳糖苷酶染色固定液,室溫固定 15min。對于其它類型的培養(yǎng)板,固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進行操作。
2、 吸除細胞固定液,用 PBS 或 HBSS 洗滌細胞 3 次,每次 3min。
3、 吸除 PBS 或 HBSS,每孔加入 1ml 染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器,不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器配制染色工作液。

染色工作液的配制方法參考表 1。
表 1:染色工作液的配制方法:
β-半乳糖苷酶染色液 A 10μl
β-半乳糖苷酶染色液 B 10μl
β-半乳糖苷酶染色液 C 930μl
X-Gal 溶液 50μl

說明:對于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡單的判定方法是:聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌;而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌,一旦高溫高壓處理就會嚴(yán)重變形。
4、 37℃孵育過夜,可以用 parafilm 或保鮮膜封住 6 孔板防止蒸發(fā)。
注意:37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行。
5、 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數(shù),可以去除染色工作液,加入 2ml PBS,4℃可以保存數(shù)天;或者加上封片液封片后,4℃可以保存較長時間。
(二) 懸浮細胞染色:
1、 離心收集細胞 1.5ml 離心管內(nèi),用 PBS 或 HBSS 洗滌 1 次,加入 1ml β-半乳糖苷酶染色固定液,室溫固定15min。固定時可以在搖床上緩慢搖動,以避免細胞結(jié)成團塊。
2、 離心,吸除細胞固定液,用 PBS 或 HBSS 洗滌細胞 3 次,每次 3min。
3、 離心,吸除 PBS 或 HBSS,每管加入 0.5-1ml 染色工作液。
染色工作液的配制方法參考表 1。
4、 37℃孵育過夜。注意:37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行。
5、 取部分染色后的細胞,滴加到載玻片上或 6 孔板內(nèi),普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數(shù),可以離心,去除染色工作液,然后加入 1ml PBS,4℃可以保存數(shù)天。如果離心,取細胞用于涂片,加上封片液封片后,4℃可以保存較長時間。
(三) 組織切片染色:
1、 對于石蠟切片先按照常規(guī)方法進行脫蠟和水化處理。對于冷凍切片直接按照以下步驟進行。
2、 加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液,以充分蓋住組織為宜,室溫固定不少于 15min。
3、 用 PBS 浸泡洗滌組織 3 次,每次不少于 5min。
4、 吸除 PBS,加入適當(dāng)量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表 1。
5、37℃孵育過夜,可以用 parafilm 或保鮮膜封住防止蒸發(fā)。把整個切片浸泡在染色工作液中。注意:37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行。
5、 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察,加上封片液封片后 4℃可以保存較長時間。

注意事項:
1、 β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蝕性和毒性,操作時請注意防護。
2、 β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的 pH 條件,不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行染色反應(yīng)。用于細胞培養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的 pH 值,而導(dǎo)致染色失敗。
3、 β-半乳糖苷酶染色液 B 在剛剛?cè)芙夂髸^察到有沉淀,屬正?,F(xiàn)象,充分混勻或 Vortex 后,沉淀會全部溶解。作為常規(guī),試劑使用前必須確保沉淀全部溶解,并且混勻。
4、 配制染色工作液時需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器,不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器。但染色時可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中進行,例如普通的 6 孔板就可以用作染色的容器。
5、 需自備 PBS 或 HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
6、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關(guān)文獻:

《Exosomes from hyperglycemia-stimulated vascular endothelial cells contain versican that regulate calcification/senescence in vascular smooth muscle cells》 作者:Shuang Li, Jun-Kun Zhan, Yan-Jiao Wang, Xiao Lin, Jia-Yu Zhong, Yi Wang, Pan Tan, Jie-Yu He, Xing-Jun Cui, Yi-Yin Chen, Wu Huang and You-Shuo Liu 期刊:Cell & Bioscience 影響因子:3.355 PMID:30622695

β-半乳糖苷酶染色試劑盒 G1580

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