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說明：熒光色素；用于DNA、染色體和核酸的染色；熒光染色法和免疫熒光技術(shù)。Hoechst 33258 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，對細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33258 常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測，也可以用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。

物理性狀：黃色深黃色粉末；溶于水，黃或棕色溶液，參考濃度為9.80 - 10.20 mg/ml；熔點＞300℃。

用途：細(xì)胞遺傳學(xué)研究的常用試劑，熒光染色細(xì)胞的DNA ，插入DNA的A-T區(qū)，具有低的細(xì)胞毒性，形成膜滲透性熒光DNA鏈。

用于細(xì)胞核染色時，推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml。

熒光染料 Hoechst 33258

別名：2'-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)- 2,5'-bi(1H-benzimidazole) trihydrochloride;2-[2- (4-Hydroxyphenyl)-6-benzimidazoyl]-6-(1-methyl-4- piperazyl)benzimidazole trihydrochloride;HOE 33258； Hoechst 33258

配制母液

Hoechst 33258溶于水，溶解度可達(dá)10mg/ml。因此可配制成10mg/ml的母液于4℃避光保存。

注意事項

1) Hoechst 33258 對人體有一定刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。

2) 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。

3) 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.   用PBS或合適的緩沖液制備10～50µM Hoechst 33258染色液。

2.   固定的細(xì)胞或組織染色：

對于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst33258染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33258染色。

a) 對于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細(xì)胞：少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

b)  吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

c) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長460nm。

3.  活細(xì)胞或組織染色：

a) 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1ml染色液，對于96孔板一個孔需加入100μl染色液。

b) 在 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。

c) 用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

d) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長460nm。

 相關(guān)文獻(xiàn)：

《Dioscin-6′-O-acetate inhibits lung cancer cell proliferation via inducing cell cycle arrest and caspase-dependent apoptosis》 作者:XuejiaoLiaZhuoQubSongsongJingcXiaLiaChengchengZhaoaShuliMandYingWangeWenyuanGaoac 期刊:Phytomedicine 影響因子:3.61 PMID:30668391
《Protective effect of 17β-estradiol on hydrogen peroxide induced apoptosis of rat nucleus pulposus cells》 作者:Sheng-Hua Ning, Si-Dong Yang, Xu Zhang, Huan-Liu, Hai-Kun Wei, Hai-Ying Wang, Da-Long Yang, Wen-Yuan Ding 期刊:CLINICAL 影響因子:0.848 PMID:
《Protein kinase Cα inhibits myocardin-induced cardiomyocyte hypertrophy through the promotion of myocardin phosphorylation》 作者:Weizong Li,  Nan Wang,  Man Li,  Huiqin Gong,  Xinghua Liao, Xiaolong Yang , Tongcun Zhang 期刊:Acta Biochimica et Biophysica Sinica 影響因子:1.807 PMID:26206583
《Ethyl Pyruvate Attenuates CaCl2-Induced Tubular Epithelial Cell Injury by Inhibiting Autophagy and Inflammatory Responses》 作者:Zhao J， Cheng J， Li C， Xu M，Ma C， Qin L， Yi K， Liao N 期刊:kidney blood pressure research 影響因子:2.123 PMID:30352436
 

熒光染料 Hoechst 33258