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產品名稱:通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)

產品型號:RP1100

產品報價:

產品特點:通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)適用于各種 RNA制品的反轉錄反應以及隨后的PCR擴增。它采用M-MLV進行反轉錄反應,能夠獲得較長的反轉錄產物。同時,在20ul反轉錄體系和50ul PCR反應體系中,還可以一次性得到足夠量的PCR產物用于后續(xù)的克隆實驗

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RP1100通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)的詳細資料:

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)產品簡介

莫洛尼鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MLV RT)是一種RNA依賴的DNA聚合酶,能使mRNA>5kb)轉錄為cDNAM-MLV RTRNase H活性相對于禽成髓細胞瘤病毒反轉錄酶較弱,更適合用來反轉錄較長的mRNA。M-MLV RT應用于以RNA為模板合成cDNA的*條鏈。

注意:M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反轉錄酶,因此要得到和用AMV 反轉錄酶一樣產量的cDNA需加入更多單位的M-MLV反轉錄酶。

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)使用方法

1)使用方法簡介以用2mgRNA為例。在無RNase離心管中,加入0.5mg引物含總RNA的樣品中,總體積不大于15ml。70℃,5分鐘打開模板鏈形成的二級結構。立即放于冰上降溫防止二級結構恢復,隨后短暫離心使液體集中在離心管底。

2)加入以下成分到已退火后的引物-模板混合物中。

注意:不要改變引物的加入比率。

M-MLV 5×Reaction Buffer                                      5ml

dATP,10mM                                                          1.25ml

dCTP,10mM                                                          1.25ml

dGTP,10mM                                                          1.25ml

dTTP10mM                                                          1.25ml

Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor         25 units

M-MLV RT                                                              200 units

無核酸水后體積 25ml

3)輕輕混勻離心管,如果使用隨機引物在37℃孵育60分鐘,其他引物則42℃孵育。延伸溫度在3742℃之間佳。

4)M-MLV RT 用于合成cDNA的*鏈。往后的合成則需要根據(jù)需要自行設計引物再次合成。

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)Buffer組成

M-MLV RT 5×Reaction Buffer

250mM     Tris-HCl(PH 8.3 室溫下)

375mM     KCl

15mM     MgCl2

50mM     DTT

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)來源

大腸桿菌表達純化

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)保存條件

-20℃保存。避免經(jīng)常凍融。

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